ISSR-PCR као једноставна дијагностичка метода за разликовање криптичних врста Nannospalax leucodon (Spalacinae, Rodentia)

Abstract

Врсте слепог кучета из рода Nannospalax се, поред бројних адаптација на подземни начин живота, карактеришу и израженом варијабилношћу кариотипа. До сада су описане чак 74 различите хромозомске форме (ХФ), али су званично признате само три врсте.1 Свака је заправо комплекс врста са статусом „недовољно података“ на IUCN Red List of Threatened Species. Европске врсте овог рода сачињавају комплекс N. leucodon supersp.1 Међу њима је више од 20 различитих ХФ, од којих је пет (hungaricus, serbicus, montanoserbicus, syrmiensis, montanosyrmiensis) присутно у Србији, а последње две се воде као угрожене.2 Иако су међусобно репродуктивно изоловане и филогенетски удаљене, због недостатка морфолошких разлика представљају криптичне врсте. Са конзервационог аспекта је веома важно вршити мониторинг њихових популација и утврдити ареале распростањења. Стога је неопходно развити поуздану и неинвазивну методу за њихову ефикасну детерминацију. Inter Simple Sequence Repeat ˗ Polymerase Chain Reaction (ISSRPCR) техника, која продукује ISSR маркере – анонимне секвенце ДНК ограничене инвертованим тандемским поновцима, се показала као корисна у идентификацији морфолошки сличних врста код неколико сисарских таксона.3 Од 11 различитих ISSR прајмера тестираних на присуство фрагмената ДНК специфичних за врсту, на укупном узорку од 25 јединки, три прајмера (CAA)5GC; (CAG)4AC и (GA)8AC су дала информативне профиле ДНК, обезбеђујући поуздано и јасно препознавање свих пет анализираних криптичних врста.